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Western Blot總是狂踩坑?這份實驗優化試劑總結請收好!


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蛋白質免疫印跡法(也稱蛋白印跡、免疫印跡或Western Blot)使用抗體來識別與轉印膜結合的特定蛋白質靶標,利用抗體-抗原相互作用的特異性,從復雜的蛋白質混合物(例如細胞或組織裂解液)中鑒定目的蛋白。目前廣泛應用于分子生物學、生物化學和免疫遺傳學實驗中。

然而,Western Blot步驟多、耗時長,忽略每一個細節都可能影響最終的結果。因此我們總結了一份WB專用試劑清單,全方位助您在樣品準備、凝膠電泳、轉膜步驟過程中避雷,提升實驗效率!



◆樣品制備

RIPA(Radio Immunoprecipitation Assay)裂解緩沖液,是一種傳統的可用于裂解細胞或組織的快速裂解液。通常使用RIPA buffer從組織或細胞中抽提可溶性蛋白,用于后續的WB、IP、co-IP等實驗。

然而,不少細胞膜上的功能性蛋白,會形成不溶性的脂筏(Lipid Raft)結構,常規的RIPA buffer不能溶解。SDS 能溶解脂筏但具有很強的變性作用,會破壞蛋白的結構和功能。UltraRIPA buffer kit則能很好地解決這個兩難,使用buffer A和buffer B的組合,實現迅速、高效地提取抗去垢劑的脂筏蛋白質,且不會使蛋白失活,后續可對脂筏中蛋白進行下游分析和活性測試。


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產品編號

產品名稱

規格

RIPA Buffer

100 mL

250 mL

UltraRIPA kit for Lipid Raft
UltraRIPA 脂筏提取緩沖液套裝

1 kit



◆凝膠電泳

WIDE-VIEW? Prestained Protein Size Marker Ⅲ是預染蛋白SDS-PAGE用分子量標記,可直接使用無需稀釋,可以跑出12條偶聯染料的有色條帶,并且不會發生彎曲,用于指示各條帶的位置、判斷蛋白質轉膜效率。


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產品編號

產品名稱

規格

WIDE-VIEW? Prestained Protein Size Marker Ⅲ
WIDE-VIEW? 預染蛋白質標記Ⅲ

25 μL

500 μL

500 μL×3



Phos-tag? Magenta是最受歡迎的Phos-tag?凝膠熒光染料,無需放射性物質、化學物質標簽、抗體,即可在生理pH范圍內對SDS-PAGE凝膠的磷酸化蛋白進行特異性染色。另還有多種顏色供選擇。


產品編號

產品名稱

規格

Phos-tag? Magenta
Phos-tag?品紅熒光染料

0.2 mg

Phos-tag? Aqua
Phos-tag? 淺綠熒光染料

0.2 mg

Phos-tag? Yellow
Phos-tag? 黃色熒光染料

0.2 mg

Phos-tag? Cyan
Phos-tag? 藍綠熒光染料

0.2 mg



含2-巰基乙醇的傳統樣品緩沖液(產品編號#)適用于Laemmli體系凝膠,是一種可廣泛兼容各種應用的常規緩沖液。


產品編號

產品名稱

規格

Sample Buffer Solution(2ME+)(×2)

25 mL



然而當需要分離分子量范圍寬廣的蛋白時,只需將獨特的大范圍分離緩沖液AllView PAGE Buffer替代常規電泳buffer,即可在固定濃度凝膠上實現梯度膠電泳效果,不需要花時間配梯度膠或購買昂貴的商業化梯度膠。


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產品編號

產品名稱

規格

AllView PAGE Buffer

500 mL



◆蛋白質轉印

為了進一步特異性檢測靶蛋白,通常需要將蛋白從電泳凝膠上轉印到NC膜或PVDF膜上,因此轉膜是決定WB成敗的最關鍵因素之一,轉膜效率的提升對于優化實驗也至關重要。高效轉膜液AquaBlot? 10×High Efficiency Transfer Buffer均通用于濕轉和半干轉,比傳統的Towbin buffer(Tris-甘氨酸)及Towbin SDS buffer效率高。尤其適用于分析磷酸化水平的Phos-tag?凝膠的轉印。


產品編號

產品名稱

規格

AquaBlot? 10×High Efficiency Transfer Buffer 

30 mL

1 L



Phos-tag? Biotin是與生物素結合的Phos-tag?,不受氨基酸種類和序列的影響,可直接靈敏檢測PVDF膜上的磷酸化蛋白,無需PVDF膜的封閉處理,無需預先進行電泳分離。其中以BTL-111的靈敏度最高。


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使用Phos-tag? Biotin檢測


產品編號

產品名稱

規格

Phos-tag? BiotinBTL-111 1mM AqueousSolution

 Phos-tag 生物素1mM水溶液

0.1 mL



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Immuno-enhancer是免疫印跡抗原抗體反應促進劑。當抗體的反應性不理想時,Immuno-enhancer可以作為稀釋液和抗體混合,促進抗原-抗體反應,提高WB檢測靈敏度,獲得高信噪比的成像效果。


產品編號

產品名稱

規格

Immuno-enhancer

免疫印跡抗原抗體反應促進劑

10 tests

40 tests



還在排隊等成像系統?

Enzo的WESTERNVIEW? Detection Kit是專用于Western Blot檢測的免疫印跡顯色試劑。在抗體孵育后加入,無需顯影、無需專用設備,即可肉眼觀測到低背景、信號持久的清晰條帶。無需成像設備和顯影液也可使用!


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使用抗體孵育后,再用WESTERNVIEW? Detection Kit (Anti-Mouse)顯影


產品編號

產品名稱

規格

WESTERNVIEW? Detection Kit (Anti-Mouse)

1 kit

WESTERNVIEW? Detection Kit (Anti-Rabbit)

1 kit

WESTERNVIEW? Dual Detection Kit (Anti-Mouse/Anti-Rabbit) 

1 kit


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